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 circRNA服务

circRNA服务
circRNA荧光素酶报告检测
来源: | 作者:geneseed | 发布时间: 2017-09-03 | 11505 次浏览 | 分享到:


Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。

本实验适用于验证circRNA sponge功能,当miRNAscircRNA吸附,理论上细胞内miRNA的总量不会产生变化,因此无法通过qRT-PCR检测来判断miRNA是否吸附。我公司利用psiCHECK2质粒,对miRNAscircRNA的关系作出准确判断,其原理简述如下:

1)构建一个将circRNA特定片段插入到荧光素酶报告基因质粒psiCHECK2中;

2)将要检测的miRNA与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此miRNA能够与circRNA结合,则荧光素酶基因就会下调,荧光素酶的表达量与miRNA-circRNA的作用强度成反比;

3) 如果将circRNA序列具有 sponge功能的片段进行突变,则质粒与miRNA共转染到细胞中,荧光素酶的表达量将不再受miRNA的影响。


技术优势:


(1)采用psiCHECK2质粒Luciferase双荧光报告系统,可以获得宽泛的线性定量范围与极高的灵敏度;
2)采用瞬时转染技术,操作简便、快速,周期短,适用于绝大多数细胞类型。


实验提供 
1)克隆含有circRNA或结合位点序列的报告质粒;


2详细实验结果报告与数据分析