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 circRNA服务

circRNA服务
circRNA RIP实验
来源: | 作者:geneseed | 发布时间: 2017-09-03 | 10552 次浏览 | 分享到:

  RNA的功能已经超出作为遗传信息传递中介的作用,很多类型的RNA分子直接可以发挥功能,RNA发挥功能的过程中,与靶分子的结合是关键的一步,分析,鉴定到真实的RNA与蛋白质的相互作用是探索RNA功能的关键。
        RIP实验是基于蛋白研究RNA-蛋白相互作用的技术,该技术是全基因组水平的检测技术,适合体内研究。


 

实验流程:

1.细胞裂解
2.捕获RNA-蛋白复合物
3.洗脱
4.检测


实验实例:

Hela细胞裂解产物为样本,以anti-SNRNP70为目的抗体,以正常兔IgG为阴性抗体,进行免疫沉淀。

免疫沉淀所得蛋白质样品,进行Western blot检测,Input样本与目的样本在约70KDa大小位置有明显条带,阴性对照样本无条带。
免疫沉淀所得RNA样品为模板,以U1 snRNA特异RIP引物,进行RT-PCR分析,input样本与目的样本可见明显的PCR产物,指示SNRNP70富集U1 snRNA。而阴性对照与空白对照PCR产物较弱,指示正常兔IgG与磁珠对U1 snRNA的非特异富集较少。

Western blot检测:

 

RNA 检测:

 

 

电泳跑胶图:

 


 

PCR检测结果