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 circRNA服务

circRNA服务
circRNA RIP(RNA immunoprecipitation)实验
来源: | 作者:geneseed | 发布时间: 2017-09-03 | 7164 次浏览 | 分享到:

RNA的功能已经超出作为遗传信息传递中介的作用,很多类型的RNA分子直接可以发挥功能,RNA发挥功能的过程中,与靶分子的结合是关键的一步,分析鉴定到真实的RNA与蛋白质的相互作用是探索RNA功能的关键。

RIP实验是基于蛋白研究RNA-蛋白相互作用的技术,该技术是全基因组水平的检测技术,适合体内研究。使用RIP级别的抗体,通过偶联磁珠,把结合在蛋白上的circRNA抓取下来做后续分析,如芯片分析,RT-PCR或者下一代测序。


 

服务内容
        1)样本总蛋白提取及与特定抗体反应;
        2)用Protein A/G捕获特定的抗体-蛋白-circRNA复合物;
        3)洗涤去掉未被捕获的组份,得到磁珠-抗体-蛋白-circRNA复合物;
        4)通过RT-PCR或测序检测IP结果;
        5)向客户提交实验结果图、分析结果及实验报告。
客户提供
       足量的组织、细胞以及目的蛋白的一抗。
我们提供
        完整、详细、客观真实的实验过程及结果报告单。

实验实例:

Hela细胞裂解产物为样本,以anti-SNRNP70为目的抗体,以正常兔IgG为阴性抗体,进行免疫沉淀。

免疫沉淀所得蛋白质样品,进行Western blot检测,Input样本与目的样本在约70KDa大小位置有明显条带,阴性对照样本无条带。

 

免疫沉淀所得RNA样品为模板,以U1 snRNA特异RIP引物,进行RT-PCR分析,input样本与目的样本可见明显的PCR产物,指示SNRNP70富集U1 snRNA。而阴性对照与空白对照PCR产物较弱,指示正常兔IgG与磁珠对U1 snRNA的非特异富集较少。

 

RNA 检测:

 

 

电泳跑胶图:

 


 

PCR扩增曲线:

 

 

 

溶解曲线: