标题摘要内容
 circRNA服务

circRNA服务
circRNA AAV与慢病毒包装服务
来源: | 作者:geneseed | 发布时间: 2018-03-29 | 1841 次浏览 | 分享到:
腺相关病毒(AAV)简介
circRNA AAV包装服务

腺相关病毒(Adeno-Associated Viral Vector,AAV)是一类微小的单链DNA病毒,直径约20-30nm,它依赖于其他病毒(如腺病毒)进行复制。AAV基因组约4700bp,包括上下游两个开放读码框架(ORF),位于分别由145bp组成的2个反向末端重复序列(ITR)之间。重组腺相关病毒(Recombinant AAV,rAAV)去除了其基因组的全部编码蛋白序列Rep和Cap,只留两端带有ITR序列作为包装信号。1984年始rAAV载体被证明能转导外源基因进入哺乳动物细胞内,1990年被FDA认可,成为用于临床的安全基因传递载体。现在AAV因具有宿主范围广、安全性高、免疫原性低、表达稳定和物理性质稳定等优点,已被广泛地应用于基础研究和临床试验。

至今,已出上百种自然界AAV血清型和经工程改造外壳的 AAV 载体。这些载体具有不同的器官、组织特异性及其它独特的性质,让基因转导工具的选择更丰富更个性化。
 
 图1 AAV基因组结构
腺相关病毒(AAV)生物学特性:
表1 不同病毒的生物学特性比较
AAV病毒特点:
1 安全性高:野生型AAV暂未发现对人体致病,重组AAV去除了大部分基因组元件,更为安全;
2 免疫原性低:AAV的基因组仅4700bp,进行动物实验时造成的免疫反应小;
3 宿主范围广:能感染分裂细胞和非分裂细胞,可用于细胞水平和动物水平;
4 表达稳定:能介导基因在一定时期内的稳定表达;
5 病毒稳定:在-80℃可长期保存。
腺相关病毒(AAV)载体不同血清型:

研究发现AAV具有多种血清型,各种不同血清型的AAV载体的主要区别是衣壳蛋白不同,因此对不同的组织和细胞的转染效率存在差异。由于相同的 AAV 血清型在啮齿类动物及灵长类动物中的感染特性不尽相同,在文献中对各组织的 AAV 血清型感染能力比较可能存在不同结果,可以参考前人的研究结果,针对不同组织器官选择相应血清型的AAV病毒,或通过预实验测试确定理想的血清型。

 表2 动物体内实验血清型推荐(小鼠)


 circRNA过表达腺相关病毒(AAV)结果展示
 
 CNE2细胞(AAV感染48h)                  小鼠结肠组织(AAV感染3周)

小鼠尾静脉注射AAV 三周后提取组织RNA进行荧光定量PCR检测;与注射空白对照病毒组相比,注射Has_circ_0000147 过表达病毒组的小鼠,在心肌组织和肝脏组织中Has_circ_0000147表达量明显上调,分别是对照组的69倍和142倍。

   

293细胞感染不同circRNA过表达AAV 48h后提取RNA进行荧光定量PCR检测,与感染对照病毒组相比,过表达AAV组上调几百至几千倍。

  
腺相关病毒(AAV)服务内容



circRNA 慢病毒包装服务

慢病毒简介

慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。以慢病毒基因组为基础,由所需的目的基因取代部分基因构建而成现在常用的慢病毒载体,已成为生物科研工作中重要的研究工具。慢病毒载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而实现持久表达。在感染能力方面,我们提供的慢病毒其外壳蛋白为 VSVG,可以有效感染分裂和非分裂细胞,应用十分广泛。现使用的慢病毒为“自杀”性病毒,即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞,也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒,使用更加安全。不过,虽然慢病毒中的毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代,属于假型病毒,但该病毒仍然具有潜在的生物学危险,建议不要使用编码已知可能会致癌或有毒性的基因的假型病毒。我公司推出的circRNA 过表达载体pLO-ciR和pLCDH-ciR均为慢病毒载体,可用于瞬时转染或慢病毒包装。  


慢病毒生物学特性:
1 安全性高:慢病毒中的毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代,属于假型病毒;
2 宿主范围广:能感染分裂细胞和非分裂细胞,可用于细胞水平和动物水平;
3 表达稳定:高频整合,通过筛选可以获得稳定表达细胞株;
4 插入基因长度大:一般线性序列6k以内可以构建载体,circRNA因环化效率限制,一般建议200-2000bp。

 circRNA过表达慢病毒结果展示

 

 293细胞(慢病毒感染48h)             U87细胞(慢病毒感染48h)




293细胞感染circRNA过表达慢病毒48h后筛选,获得稳定细胞株后提取RNA,进行PCR检测。与感染对照病毒组相比,过表达慢病毒组明显上调。

            

慢病毒服务内容

上一篇:
下一篇: circRNA Pulldown