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RNase R
来源: | 作者:geneseed | 发布时间: 2018-03-29 | 30715 次浏览 | 分享到:



产品简介

RNase R (Ribonuclease R)是一种来源于大肠杆菌RNR超家族的3’-5’核糖核酸外切酶,可从3’-5’方向将RNA逐步切割成二核苷酸和三核苷酸。RNase R可消化几乎所有的线性RNA分子,但不易消化环形RNA、套索结构或3’突出末端少于7个核苷酸的双链RNA分子。RNase R常用于基因表达和可变剪切研究,可消化线性RNA以使环形RNA (circRNAs)或套索结构RNA (lariat RNA)得到富集。


    


产品规格
货号
试剂
规格
保存条件
R0301
RNase R(20U/μL)
500 U
-20℃
10X Reaction Buffer
1 mL



产品
组分

Storage Buffer

50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1% Triton® X-100, 50% Glycerol

10X Reaction Buffer

200 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 M KCl, 1 mM MgCl2



单位
定义
        标准反应体系下,于 37℃,10 min 1 μg poly(A)转化成酸溶核苷酸所需的酶量定义为一个活力单位(U)


反应体系

        20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 0.1 mM MgCl2, 37℃孵育。

        注:1RNase R 0.1-0.5 mM Mg2+存在时活性最高,反应中 EDTA 可能降低 RNase R 活性,此时可额外添加 MgCl2 使 Mg2+ 浓度最高达到 0.5 mM2孵育后可于 70℃,10 min 使酶失活,再进行下游实验如逆转录;也可不灭活,直接纯化后进行下游实验。


质量控制

        SDS-PAGE 检测纯度>99%Total RNA  RNase R 消化后进行 RT-qPCR 检测,线性 RNA 丰度明显降低, 环形RNA 丰度基本不变。


性能比较-RNA电泳检



    
        将10U RNase R加入到2.5 μg total RNA中,于37℃孵育30 min,之后直接进行电泳检测,结果显示RNase R+组28/18/5S条带变淡(不可见),表明RNase R对total RNA的消化作用。吉赛和公司e或公司a的RNase R对total RNA消化效果相当。


性能比较
-
RT-qPCR检测




        将10U RNase R加入2.5 μg total RNA37孵育30 min,之后进行RT-qPCR实验,结果显示RNase R+β-actinFGFR2丰度都明显降低表明RNase R消化线性RNA。吉赛和公司eRNase R线性RNA消化效果相当,优于公司aRNase R




        将
10U RNase R加入2.5 μg total RNA37孵育30 min,之后进行RT-qPCR实验,结果显示RNase R+ 组中hsa_circFOXO3_002hsa_circMTO1_001丰度基本不变,表明环形RNA耐受RNase R消化。吉赛和公司e或公司aRNase R效果相当。

注:数据计算以RNase R+吉赛”组为对照,设定其相对丰度值为1



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