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RNase R
来源: | 作者:geneseed | 发布时间: 2018-03-29 | 15968 次浏览 | 分享到:



Ribonuclease R (RNase R)

货号

试剂

规格

保存条件

R0301

RNase R (20U/μL)

500 U

-20

10X Reaction Buffer

1 mL


RNase R (Ribonuclease R)是一种来源于大肠杆菌RNR超家族的3’-5’核糖核酸外切酶,可从3’-5’方向将RNA逐步切割成二核苷酸和三核苷酸。RNase R可消化几乎所有的线性RNA分子,但不易消化环形RNA、套索结构或3’突出末端少于7个核苷酸的双链RNA分子。RNase R常用于基因表达和可变剪切研究,可消化线性RNA以使环形RNA (circRNAs)或套索结构RNA (lariat RNA)得到富集。






产品组分:

Storage Buffer

50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1%

Triton® X-100, 50% Glycerol

10X Reaction Buffer

200 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 M KCl, 1 mM MgCl2


单位定义
标准反应体系下,于 37℃,10 min 1 μg poly(A)转化成酸溶核苷酸所需的酶量定义为一个活力单位(U)


反应体系

20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 0.1 mM MgCl2, 37℃孵育。

注:1RNase R 0.1-0.5 mM Mg2+存在时活性最高,反应中 EDTA 可能降低 RNase R 活性,此时可额外添加 MgCl2 使 Mg2+ 浓度最高达到 0.5 mM2孵育后可于 70℃,10 min 使酶失活,再进行下游实验如逆转录;也可不灭活,直接纯化后进行下游实验。


质量
控制:
SDS-PAGE 检测纯度>99%Total RNA RNase R 消化后进行 RT-qPCR 检测,线性 RNA 丰度明显降低, 环形RNA 丰度基本不变。



参考文献:
1. Cheng ZF, Deutscher MP. J. Biol. Chem. 2002; 277:21624–21629.
2.Suzuki H et al.. Nucleic Acids Res. 2006; 34(8), e63.
3.Vincent HA, Deutscher MP. J Biol Chem. 2006 Oct 6; 281(40):2976975.

性能比较-
RNA电泳检

        将10U RNase R加入2.5 μg total RNA37孵育30 min,之后直接进行电泳检测,结果显示RNase R+28/18/5S条带变淡不可见表明RNase Rtotal RNA消化作用。吉赛和公司e或公司aRNase Rtotal RNA化效果相当。


     性能比较-RT-qPCR检测
 



10U RNase R加入2.5 μg total RNA37孵育30 min,之后进行RT-qPCR实验,结果显示RNase R+β-actinFGFR2丰度都明显降低表明RNase R消化线性RNA。吉赛和公司eRNase R线性RNA消化效果相当,优于公司aRNase R




将10U RNase R加入到2.5 μg total RNA中,于37℃孵育30 min,之后进行RT-qPCR实验,结果显示RNase R+ 组中hsa_circFOXO3_002和hsa_circMTO1_001的丰度基本不变,表明环形RNA耐受RNase R的消化。吉赛和公司e或公司a的RNase R效果相当。



说明书下载:

客户文章:

1. hsa_circ_0006168 sponges miR-100 and regulates mTOR to promote the proliferation, migration and invasion of esophageal squamous cell carcinoma.

2. Systematic identification of circular RNAs and corresponding regulatory networks unveil their potential roles in the midgut of Apis cerana cerana workers .

3 .Identification and functional prediction of circRNAs in Populus Euphratica Oliv. heteromorphic leaves.

4. Genome-wide analysis of RNAs associated with Populus euphratica Oliv. heterophyll morphogenesis.