细胞培养和血清制品制备中极易发生支原体污染，被污染早期往往难以察觉，严重影响实验结果。常用的支原体检测方法有直接培养法、DNA染色法和PCR法等，其中实时荧光定量PCR法（qPCR）在检测准确率、特异性和敏感性上都有明显的优势。
图1 不同检测方法的比较（Molla Kazemiha et al., 2016）
GSDetectTM Taqman Mycoplasma Detection Kit (UNG plus) 基于Taqman qPCR法，针对支原体16S rRNA的保守区域序列，设计特异性引物和荧光探针（FAM标记）用于支原体DNA的检测。本试剂盒可直接以细胞培养上清或血清等生物材料为模板，检测常见的16种支原体污染。
试剂盒内添加dUTP/UNG酶体系，能避免PCR产物气溶胶污染导致的假阳性，大幅提高检测的准确性。
产品特点
1 操作简便，直接使用1 μL细胞培养上清或血清进行检测，无需提取DNA。
2 检测灵敏度高，准确率高，耐受青霉素和链霉素或其他抑制物的影响。
3 特异性强，只能扩增支原体DNA，不会扩增细菌真菌或真核细胞的DNA。
4 检测快速，最快1小时即可判定结果。
产品组分
D0101
24 rxns
D0102
96 rxns
4×280 μL
特异性引物、探针等
4×304 μL
100 μL
200 μL
组分名称
规格 主要成分
GSDetectTM Myco Mix A 280 μL 特异性引物、探针等 GSDetectTM Myco Mix B 304 μL 热启动Taq酶、UNG酶等 Myco-Positive Mix 25 μL 含阳性序列的DNA片段 Myco-Free Water 50 μL 支原体阴性的超纯水
GSDetectTM Myco Mix A GSDetectTM Myco Mix B 热启动Taq酶、UNG酶等 Myco-Positive Mix 含阳性序列的DNA片段 Myco-Free Water 支原体阴性的超纯水
| M. orale* | M. mycoides | M. capricolum | M. arthritidis |
| M. gallisepticum | M. hominis* | M. hyorhinis* | M. penetrans |
| M. pirum* | M. salivarium* | M. synoviae | M. arginini* |
| M. fermentans* | M. pneumoniae | M. genitalium | A. laidlawii* |
参考文献
1. Nikfarjam L, Farzaneh P. Prevention and detection of Mycoplasma contamination in cell culture. Cell J. 2012 Winter;13(4):203-12.
2. Molla Kazemiha V, Bonakdar S, Amanzadeh A, Azari S, Memarnejadian A, Shahbazi S, et al., Real-time PCR assay is superior to other methods for the detection of mycoplasma contamination in the cell lines of the National Cell Bank of Iran. Cytotechnology. 2016 Aug;68(4):1063-80.
产品说明书