细胞培养和血清制品制备中极易发生支原体污染，被污染早期往往难以察觉，严重影响实验结果。常用的支原体检测方法有直接培养法、DNA染色法和PCR法等，其中实时荧光定量PCR法（qPCR）在检测准确率、特异性和敏感性上都有明显的优势。
图1 不同检测方法的比较（Molla Kazemiha et al., 2016）
GSDetectTM Taqman Mycoplasma Detection Kit (UNG plus) 基于Taqman qPCR法，针对支原体16S rRNA的保守区域序列，设计特异性引物和荧光探针（FAM标记）用于支原体DNA的检测。本试剂盒可直接以细胞培养上清或血清等生物材料为模板，检测常见的16种支原体污染。
试剂盒内添加dUTP/UNG酶体系，能避免PCR产物气溶胶污染导致的假阳性，大幅提高检测的准确性。
产品特点
1 操作简便，直接使用1 μL细胞培养上清或血清进行检测，无需提取DNA。2 检测灵敏度高，准确率高，耐受青霉素和链霉素或其他抑制物的影响。
3 特异性强，只能扩增支原体DNA，不会扩增细菌真菌或真核细胞的DNA。
4 检测快速，最快1小时即可判定结果。
产品组分
|
D0101 24 rxns |
组分名称 |
规格 |
主要成分 |
|
GSDetectTM Myco Mix A |
280 μL |
特异性引物、探针等 |
|
|
GSDetectTM Myco Mix B |
304 μL |
热启动Taq酶、UNG酶等 |
|
|
Myco-Positive Mix |
25 μL |
含阳性序列的DNA片段 |
|
|
Myco-Free Water |
50 μL |
支原体阴性的超纯水 |
|
|
D0102 96 rxns |
GSDetectTM Myco Mix A |
4×280 μL |
特异性引物、探针等 |
|
GSDetectTM Myco Mix B |
4×304 μL |
热启动Taq酶、UNG酶等 |
|
|
Myco-Positive Mix |
100 μL |
含阳性序列的DNA片段 |
|
|
Myco-Free Water |
200 μL |
支原体阴性的超纯水 |
|
|
M. orale* |
M. mycoides |
M. capricolum |
M. arthritidis |
|
M. gallisepticum |
M. hominis* |
M. hyorhinis* |
M. penetrans |
|
M. pirum* |
M. salivarium* |
M. synoviae |
M. arginini* |
|
M. fermentans* |
M. pneumoniae |
M. genitalium |
A. laidlawii* |
参考文献
1. Nikfarjam L, Farzaneh P. Prevention and detection of Mycoplasma contamination in cell culture. Cell J. 2012 Winter;13(4):203-12.
2. Molla Kazemiha V, Bonakdar S, Amanzadeh A, Azari S, Memarnejadian A, Shahbazi S, et al., Real-time PCR assay is superior to other methods for the detection of mycoplasma contamination in the cell lines of the National Cell Bank of Iran. Cytotechnology. 2016 Aug;68(4):1063-80.
说明书下载