KDHPTM CRISPR/CasRx Vector Kit

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自主产品

KDHPTM CRISPR/CasRx Vector Kit

来源: | 作者:geneseed | 发布时间: 2020-11-10 | 587 次浏览 | 分享到:

产品简介

CRISPR/Cas13是继CRISPR/Cas9之后新发现的一类核酸酶系统，与Cas9靶向DNA不同，Cas13可以特异靶向RNA，实现对RNA的敲低、定点编辑、剪切调控和检测清除等。现已发现LwaCas13a、PspCas13b、PguCas13b、RanCas13b、EsCas13d、AdmCas13d、CasRx（RfxCas13d）等多个Cas13核酸酶，都可以靶向切割RNA，其中CasRx（RfxCas13d）具有最高的特异性和切割效率，也是目前发现最小的VI型CRISPR效应蛋白，能更容易利用AAV载体实现体内递送。

图1 CRISPR/CasRx系统敲低RNA示意图

CasRx靶向切割RNA时，靶标RNA的两端无需PFS，因此gRNA的设计更灵活，基本可靶向RNA的任意位置。与shRNA/CRISPRi等基因沉默技术相比，CRISPR/CasRx显示有更高的靶向特异性和敲低效率，以及最低的脱靶效应，表明其作为基因敲低工具的独特优势。

CasRx与核定位信号NLS融合表达时主要定位于细胞核，能更高效敲低mRNA及在细胞核内的其他RNA。

图2 CasRx (HA)的亚细胞定位（Konermann et al., 2018）

将gRNA设计为靶向环形RNA（circRNA）的反向剪切位点（back-splicing junction, BSJ）处时，CasRx能高效区分circRNA和其亲本基因mRNA，特异靶向敲低circRNA，而不影响mRNA。相比于siRNA/shRNA敲低circRNA时容易出现的效率低、脱靶或错误靶向mRNA，使用CRISPR/CasRx系统敲低circRNA是一个强有力的选择和补充工具。

图3 gRNA设计位置与circRNA/mRNA丰度（Li et al., 2020）。gRNA设计靶

向BSJ时，circRNA（红色）的丰度最低，而mRNA（蓝色）的丰度基本不变。

KDHP^TM CRISPR/CasRx载体试剂盒提供多种整合型载体，将CasRx和crRNA在同一个载体中表达，只需要设计合成gRNA序列并连接插入即可，载体构建和转染方便。试剂盒包含整合型通用NC载体，以及构建目标载体的配套试剂，无需酶切，通过一步反应即可快速构建CasRx/gRNA载体。

表1 四种载体区别及对应试剂盒货号

货号	载体名称	载体骨架	U6-gRNA	CMV-CasRx	NLS	GFP
C0101-RL	pCasRx-L1	慢病毒载体	有，NC	有	无	有
C0101-RNL	pCasRxN-L1	慢病毒载体	有，NC	有	有	有
C0101-RA	pCasRx-A1	AAV载体	有，NC	有	无	无
C0101-RNA	pCasRxN-A1	AAV载体	有，NC	有	有	无

注：整合型载体为通用NC载体，含有non-targeting gRNA: TCACCAGAAGCGTACCATACTC。

产品特点

简便：单一整合型载体同时表达CasRx和crRNA，仅需合成gRNA双链，一步反应即可构建。

快速：30分钟即可完成载体连接。

高效：连接克隆阳性率达95%以上。

运输与保存

4℃运输，-20℃保存，保质期一年，避免反复冻融。

产品组分

货号	规格	试剂组分
C0101-RL	20 rxns	Linearized CasRx Vector, From pCasRx-L1* DNA Ligase Mix 10X Ligase Buffer Nuclease-free Water U6 Primer (10 μM) gRNA-NC Vector, pCasRx-L1**	40 μL 10 μL 20 μL 200 μL 100 μL 2 μg
C0101-RNL	20 rxns	Linearized CasRx Vector, From pCasRxN-L1* DNA Ligase Mix 10X Ligase Buffer Nuclease-free Water U6 Primer (10 μM) gRNA-NC Vector, pCasRxN-L1**	40 μL 10 μL 20 μL 200 μL 100 μL 2 μg
C0101-RA	20 rxns	Linearized CasRx Vector, From pCasRx-A1* DNA Ligase Mix 10X Ligase Buffer Nuclease-free Water U6 Primer (10 μM) gRNA-NC Vector, pCasRx-A1**	40 μL 10 μL 20 μL 200 μL 100 μL 2 μg
C0101-RNA	20 rxns	Linearized CasRx Vector, From pCasRxN-A1* DNA Ligase Mix 10X Ligase Buffer Nuclease-free Water U6 Primer (10 μM) gRNA-NC Vector, pCasRxN-A1**	40 μL 10 μL 20 μL 200 μL 100 μL 2 μg

*: Linearized CasRx Vector为对应载体去除non-targeting gRNA序列的开环载体，末端保留连接定位序列。

**: gRNA-NC Vector为含有non-targeting gRNA的通用NC载体，与Linearized CasRx Vector为同一骨架。

实验流程

图4 CRISPR/CasRx Knockdown Cloning Kit实验流程图

说明书下载
吉赛生物KDHPTM CRISPRCasRx Vector Kit说明书Cat.No. C0101

附件：
seq-pCasRx-A1-pCasRxN-A1
seq-pCasRx-L1-pCasRxN-L1

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