circRNA qPCR引物设计circRNA qPCR检测circRNA表达分析circRNA过表达实验circRNA干扰实验细胞功能实验慢病毒包装circRNA功能分析T系列-circRNA翻译验证R系列-IRES活性检测circRNA翻译-验证研究circRNA注释及功能预测circRNA荧光素酶报告检测circRNA RIP实验circRNA pull-down实验circRNA相互作用组学研究circRNA FISH探针合成circRNA定位分析circRNA全长纳米孔测序 | ONT circRNA full-length Sequencin三代测序全转录组测序 | RNA-seqcircRNA测序 | circRNA-seqmRNA测序 | mRNA-seq小RNA测序 | miRNA-seq转录组学研究核糖体印迹测序 | Ribo-seq核糖体-新生肽链复合物测序 | RNC-seq翻译组学研究RNA m6A甲基化测序 | MeRIP-Seq染色质开放性测序 | ATAC-seq表观组学研究10×Visium空间转录组测序空间转录组学研究外泌体RNA测序 | Exosome RNA-seq外泌体提取及鉴定外泌体研究RNA免疫共沉淀测序 | RIP-seq染色质免疫共沉淀测序 | ChIP-seq核酸蛋白互作研究微生物宏基因组测序 | Metagenomics Sequencing基因组学研究生物医学大数据挖掘分析circRNA定制化分析及绘图常规组学及多组学联合分析单细胞测序数据生信分析生物信息学分析服务RNase RcircRNA qRT-PCR试剂盒circRNA检测circRNA过表达系列circRNA过表达载体系列血液基因组DNA提取试剂盒全血RNA提取试剂盒细胞RNA提取试剂盒核酸提取与纯化RNA pull-down试剂盒RIP试剂盒T7转录试剂盒(生物素标记)分子互作系列外泌体提取试剂盒Taqman探针法支原体检测试剂盒(UNG防污染版)支原体检测核糖体RNA去除试剂盒(人/大鼠/小鼠)核糖体RNA去除试剂盒(植物)RNA-seq文库构建试剂盒RNA建库接头试剂DNA磁珠RNA磁珠高通量测序系列circRNA标准品系列CircLucT7耐高温高产量RNA合成试剂盒环状RNA合成试剂盒T4 RNA连接酶1T4 RNA连接酶2circRNA制备系列原位杂交系列原位杂交系列
核糖体印迹测序 | Ribo-seq
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广义的翻译组指直接参与翻译过程的所有元件,包括但不限于核糖体、正在翻译的mRNA、调控性RNA、新生肽链及各种翻译因子等;狭义的翻译组特指正在翻译的mRNARibo-seq是指对被核糖体保护的30nt左右的mRNA片段进行深度测序分析,是目前研究翻译组学的主要技术手段之一。

25 Ribo-seq.jpg

核糖体印迹测序技术路线

测序方案

测序平台Illumina Novaseq 6000

测序模式PE150
测序数据量100 M raw reads


人类心脏翻译组学研究

The Translational Landscape of the Human Heart

Cell (2019). DOI: 10.1016/j.cell.2019.05.010(IF:36.216)

测序策略:Ribo-seq & mRNA-seq

样本分组:80例心脏组织,65例心肌病,15例正常对照


        本研究对65例扩张性心肌病(DCM)患者左心室心肌组织和15例正常对照者的左心室心肌组织进行mRNA测序(mRNA-seq)及核糖体印迹测序(ribo-seq),分析了DCM与健康对照组被翻译的RNA分子总体情况,结合之前一项心脏组织蛋白质组学的数据,系统分析了左心室心肌组织中被翻译的ORF和对应的蛋白或多肽的总体信息。共发现1090个uORF、 20763个传统的ORF以及74个dORF。还包括了来自于169个lncRNA 的339个sORF(图1)。此外,本文通过分析ribo-seq数据中被核糖体捕获的circRNA接口序列找到了40个可翻译的circRNA分子。作者分析接口位置Reads的条件是不少于9nt的跨接口碱基,在不少于3个样本且总Reads数不少于5个的才算有效的可翻译circRNA(图2)。这40个circRNA来自39个基因,其中有6个circRNA的翻译产物在早期的蛋白质组学研究中有对应的质谱线索。40个circRNA中也不乏大家耳熟能详的明星分子,包括CDR1as等等。其中circCFLAR,circSLC8A1,circMYBPC3和circRYR2是首次发现的心肌中可被翻译的circRNA分子。


Figure1. 心脏翻译组学研究概览


Figure2. Ribo profiling分析可翻译的circRNA分子




生物信息分析

基础分析

原始数据质控检查

比对结果质控

reads 在基因组上的分布分析

基因覆盖度分析

翻译图谱刻画:P-site定义确认

翻译图谱刻画:ORFs统计与对应的氨基酸序列分析


高级分析

翻译组差异基因表达分析

翻译组差异基因GO功能分析

翻译组差异基因KEGG通路分析

翻译组差异基因Rectome通路分析

circRNA翻译事件识别分析

翻译组差异circRNA宿主基因GO功能分析

翻译组差异circRNA宿主基因KEGG通路分析

翻译组差异circRNA宿主基因Rectome通路分析

翻译组差异circRNA的靶向miRNA预测分析

翻译组差异circRNA及靶向miRNA网络调控制图

差异circRNA翻译潜能预测分析


个性化分析

TE翻译效率分析

差异TE基因表达分析

差异TE基因聚类分析

差异TE基因GO/KEGG富集分析


部分结果示例

图1. P-site 评估样图


2. ORF类型数量统计图


3. Riboseq差异表达基因的火山图


Table1. Ribo-seq原始样本送样建议


送样类型

送样量

备注

细胞(细胞数)

≥1*10^7

无支原体污染

动物组织

≥200mg

 

植物组织

≥200mg

 


*翻译组测序的细胞样本处理方法和转录组测序不一样,具体处理、保存和运输方法请咨询技术支持。


物种范围:人、小鼠、大鼠,其他物种请详询销售或技术支持










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