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T7 RNA聚合酶(T7 RNA Polymerase),是一种依赖于DNA的RNA聚合酶,对T7启动子具有高度专一性,专门催化5'→3'方向的RNA形成过程。 本试剂盒利用重组T7 RNA聚合酶,以Biotin-NTP Mix为底物,在体外快速、高效合成含生物素标记的、与T7启动子下游的DNA模板反义链互补的RNA。 以线性化质粒为模板制备: 产品优势
产品信息
[1] IF5.458 Increased LDL receptor by SREBP2 or SREBP2-induced lncRNA LDLR-AS promotes triglyceride accumulation in fish. iScience
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1. T7体外生物素标记转录试剂盒1次转录出的探针,能做多少次pulldown实验? 1次转录出的探针,一般可以做2-3次pulldown实验。 2.如何制备DNA模板? DNA模板主要有两种:PCR产物和线性化质粒。其制备方法分别为: (1)PCR产物:1)设计引物(上游引物5’端含有T7启动子序列);2)用高保真DNA聚合酶进行PCR;3)PCR产物电泳后割胶回收。 (2)线性化质粒:1)设计引物(上游引物5’端含有T7启动子序列,下游引物含有可致5’突出端/平末端的酶切位点);2)用高保真DNA聚合酶进行PCR;3)PCR产物连接克隆载体;4)质粒抽提及酶切线性化 3.转录后RNA如何纯化? Trizol LS Reagent、磁珠或过柱纯化试剂盒。 4.转录结束后如何去除DNA模板 向反应液中依次添加68 μL RNase-Free Water,10 μL 10× DNase Reaction Buffer,和2 μL RNase-Free DNase I (1 U/μL),置于PCR仪上37℃孵育15 min。 5.合成的RNA电泳为何有杂带? 原因有2种:1)RNA二级结构所致:RNA未变性电泳会出现“杂带”;2)DNA模板不纯导致合成的RNA电泳有杂带。 6.RNA产量低或无RNA合成 1) 酶保存不当导致酶失活。 2)亚精胺浓度过高会导致DNA模板沉淀,最终导致RNA产量低。 建议将除了酶以外的组分平衡至室温后,再按以下顺序加样:H2O-buffer-NTP-模板-酶; 3) T7启动子缺失或错误,或T7启动子位于模板DNA下游。 |