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T7转录试剂盒(生物素标记)
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10 T7 Biotin Labeled RNA Synthesis Kit 3rxns.jpg


T7 RNA聚合酶T7 RNA Polymerase,是一种依赖于DNA的RNA聚合酶,对T7启动子具有高度专一性,专门催化5'→3'方向的RNA形成过程

本试剂盒利用重组T7 RNA聚合酶,以Biotin-NTP Mix为底物,在体外快速、高效合成生物素标记的、与T7启动子下游的DNA模板反义链互补的RNA。



以线性化质粒为模板制备:


产品优势

  • 快速高效、产量高: 1 μg DNA模板单次反应可产生不低于50 μgRNA

  • 应用范围广:可用于RNA Pull-downNorthern Blot、原位杂交等实验;

  • 模板兼容性好:线性化质粒、PCR产物均可用做RNA合成的模板;

  • 无放射性污染:生物素标记RNA

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GENESEED®T7 Biotin Labeled RNA Synthesis Kit


R0402

3 rxns


2500

-20℃









[1] IF5.458 Increased LDL receptor by SREBP2 or SREBP2-induced lncRNA LDLR-AS promotes triglyceride accumulation in fish. iScience


吉赛生物GENESEED®T7 Biotin Labeled RNA Synthesis Kit Cat.No. R0402.pdf
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1. T7体外生物素标记转录试剂盒1次转录出的探针,能做多少次pulldown实验?

1次转录出的探针,一般可以做2-3次pulldown实验。


2.如何制备DNA模板?

DNA模板主要有两种:PCR产物和线性化质粒。其制备方法分别为:

(1)PCR产物:1)设计引物(上游引物5’端含有T7启动子序列);2)用高保真DNA聚合酶进行PCR;3)PCR产物电泳后割胶回收。

(2)线性化质粒:1)设计引物(上游引物5’端含有T7启动子序列,下游引物含有可致5’突出端/平末端的酶切位点);2)用高保真DNA聚合酶进行PCR;3)PCR产物连接克隆载体;4)质粒抽提及酶切线性化


3.转录后RNA如何纯化?

Trizol LS Reagent、磁珠或过柱纯化试剂盒。


4.转录结束后如何去除DNA模板

向反应液中依次添加68 μL RNase-Free Water,10 μL 10× DNase Reaction Buffer,和2 μL RNase-Free DNase I (1 U/μL),置于PCR仪上37℃孵育15 min。


5.合成的RNA电泳为何有杂带?

原因有2种:1)RNA二级结构所致:RNA未变性电泳会出现“杂带”;2)DNA模板不纯导致合成的RNA电泳有杂带。


6.RNA产量低或无RNA合成

1) 酶保存不当导致酶失活。

2)亚精胺浓度过高会导致DNA模板沉淀,最终导致RNA产量低。

建议将除了酶以外的组分平衡至室温后,再按以下顺序加样:H2O-buffer-NTP-模板-酶;

3) T7启动子缺失或错误,或T7启动子位于模板DNA下游。


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