circRNA标准品系列
RNA制备工具酶系列
qRT-PCR系列
分子互作系列
外泌体提取系列
支原体检测系列
circRNA过表达系列
核酸提取系列
|
产品简介 吉赛生物已建成circRNA原液生产体系,预制的circRNA标准品采用全球自主知识产权技术,完整性好、纯度高,可作为实验探索的阳性对照,用于翻译表达验证、转染递送评估、工艺流程优化等领域。 产品信息 GSPure® Circ-eGFP是编码增强型绿色荧光蛋白基因(eGFP)的circRNA,翻译表达后,可通过荧光显微镜观察到绿色荧光。 GSPure® Circ-Fluc是编码萤火虫荧光素酶基因(Luciferase)的circRNA,翻译表达后,可通过实验检测萤火虫荧光素酶活性。 GSPure® Circ-mCherry是编码红色荧光蛋白基因的circRNA,翻译表达后,可通过荧光显微镜观察到红色荧光。 产品规格
运输与保存 产品干冰运输。-80℃ 超低温保存,可以稳定存放一年。 高完整性 图1.毛细管电泳检测circRNA标准品无杂峰 高纯度 图2.HPLC检测circRNA标准品纯度达90%以上 高品质 图3.GSPure® Circ-eGFP转染293T细胞48h后荧光检测结果 图4.GSPure® Circ-Fluc转染293T细胞48/72 h后荧光素酶检测结果 图5.GSPure® Circ-mCherry转染293T细胞48h后荧光检测结果 1、本产品的使用方法及细胞转染的环状RNA用量? 答:本实验方法以使用Lipofectamine® 3000转染试剂于12孔板转染1 μg/μL CircRNA标准品为例,其它规格转染体系请参考下表,使用其它转染试剂请参考具体转染试剂说明书。 (1)接种细胞 转染前一天将细胞铺至12孔板,使转染时的细胞密度达到约60%-70%。 注:不同细胞生长速度不同,接种细胞的数量、细胞密度需要依据细胞类型、培养时间、实验目的而定,一般情况以控制到检测时细胞接近长满为宜;每孔接种的细胞数量应尽量相同,使细胞均匀分布。 (2)转染 对于每个转染样品,请按下面的步骤进行准备: 溶解circRNA:先将冻干粉产品瞬时离心,加入10 μL Nuclease-free Water 至10 μg的circRNA标准品冻干粉中,制成1 μg/μL circRNA标准品的溶液; 稀释转染试剂:50 μL Opti-MEMTM Medium(V1)中加入3 μL Lipofectamine® 3000 Transfection Reagent(V2),轻轻混匀,室温孵育10 min; 稀释circRNA:另一管50 μL Opti-MEMTM Medium(V1)中加入3 μL的P3000TM 试剂和 1 μL 的1 μg/μL circRNA标准品(V3),轻轻混匀; 将稀释好的转染试剂与稀释好的circRNA标准品混合,室温孵育5 min; 12孔板每孔更换新鲜完全培养基900 μL(V4); 将100 μL circRNA标准品转染混合液,加入到含900 μL完全培养基的细胞中,轻轻混匀; 将细胞置于37℃的CO2培养箱中培养24 - 48小时; 使用荧光倒置显微镜、激光共聚焦显微镜等荧光检测仪器检测荧光。 表1:circRNA标准品用量参考
注:实验参考用量示例,对于部分细胞类型需要进一步优化。 |