CircLuc能够在真核细胞中高效进行荧光素酶的翻译。下图为使用制备的CircLuc转染293T细胞的案例。

图1：CircLuc转染293T细胞48 h后荧光素酶检测结果

1、本产品的使用方法及细胞转染的环状RNA用量？

答：本实验方法以使用Lipofectamine® 3000转染试剂于12孔板转染1 μg/μL CircLuc为例，其他规格转染体系请参考下表，使用其他转染试剂请参考具体转染试剂说明书。

（1）接种细胞

转染前一天将细胞铺至12孔板，使转染时的细胞密度达到约60%-70%。

注：不同细胞生长速度不同，接种细胞的数量、细胞密度需要依据细胞类型、培养时间、实验目的而定，一般情况以控制到检测时细胞接近长满为宜；每孔接种的细胞数量应尽量相同，使细胞均匀分布。

（2）转染

对于每个转染样品，请按下面的步骤进行准备：

溶解circRNA：先将冻干粉产品瞬时离心，加入10 μL Nuclease-free Water 至10 μg的CircLuc冻干粉中，制成1 μg/μL CircLuc的溶液；

稀释转染试剂：50 μL Opti-MEM^TM Medium（V1）中加入3 μL Lipofectamine® 3000 Transfection Reagent（V2），轻轻混匀，室温孵育10 min；

稀释circRNA：另一管50 μL Opti-MEM^TM Medium（V1）中加入3 μL的P3000^TM 试剂和1 μL的1 μg/μL CircLuc（V3），轻轻混匀；

将稀释好的转染试剂与稀释好的CircLuc混合，室温孵育5 min。

12孔板每孔更换新鲜完全培养基900 μL（V4）；

将100 μL CircLuc转染混合液，加入到含900 μL完全培养基的细胞中，轻轻混匀；

将细胞置于37℃的CO₂培养箱中培养24 - 48小时；

使用萤火虫荧光素酶检测试剂盒检测荧光素酶活性（详细检测方法参考对应的荧光素酶检测试剂盒说明书）。

表1：CircLuc用量参考

注：实验参考用量示例，对于部分细胞类型需要进一步优化。