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CircLuc
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2 CircLuc-10μg.jpg


产品简介

吉赛生物已建成circRNA原液生产体系,预制的circRNA标准品采用全球自主知识产权技术,完整性好、纯度高,可作为实验探索的阳性对照,用于翻译表达验证、转染递送评估、工艺流程优化等领域。

CircLuc是编码萤火虫荧光素酶基因(Firefly Luciferase)的circRNA,翻译表达后,可通过实验检测萤火虫荧光素酶活性。


产品规格


产品名称货号规格目录价(元)性状

GSPure®CircLuc

R0801

100 μg

3500

冻干粉

R0802500 μg9500
R08031 mg15000
R080410 mg100000


运输与保存

产品干冰运输。-80℃ 超低温保存,可以稳定存放一年。



CircLuc能够在真核细胞中高效进行荧光素酶的翻译。下图为使用制备的CircLuc转染293T细胞的案例。


图1:CircLuc转染293T细胞48 h后荧光素酶检测结果









吉赛生物GSPure®CircLuc说明书Cat.No.R0801~04.pdf
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1、本产品的使用方法及细胞转染的环状RNA用量?

答:本实验方法以使用Lipofectamine® 3000转染试剂于12孔板转染1 μg/μL CircLuc为例,其他规格转染体系请参考下表,使用其他转染试剂请参考具体转染试剂说明书。

(1)接种细胞

转染前一天将细胞铺至12孔板,使转染时的细胞密度达到约60%-70%。

注:不同细胞生长速度不同,接种细胞的数量细胞密度需要依据细胞类型培养时间实验目的而定,一般情况以控制到检测时细胞接近长满为宜;每孔接种的细胞数量应尽量相同,使细胞均匀分布。

(2)转染

对于每个转染样品,请按下面的步骤进行准备:

溶解circRNA:先将冻干粉产品瞬时离心,加入10 μL Nuclease-free Water 至10 μgCircLuc冻干粉中,制成1 μg/μL CircLuc的溶液;

稀释转染试剂:50 μL Opti-MEMTM Medium(V1)中加入3 μL Lipofectamine® 3000 Transfection Reagent(V2),轻轻混匀,室温孵育10 min

稀释circRNA:另一管50 μL Opti-MEMTM Medium(V1)中加入3 μL的P3000TM 试剂和1 μL的1 μg/μL CircLuc(V3),轻轻混匀

将稀释好的转染试剂与稀释好的CircLuc混合,室温孵育5 min。

12孔板每孔更换新鲜完全培养基900 μL(V4);

将100 μL CircLuc转染混合液,加入到含900 μL完全培养基的细胞中,轻轻混匀

将细胞置于37℃的CO2培养箱中培养24 - 48小时

使用萤火虫荧光素酶检测试剂盒检测荧光素酶活性(详细检测方法参考对应的荧光素酶检测试剂盒说明书)。

表1:CircLuc用量参考



每孔

体积

circRNA浓度

Opti-MEMTM Medium(V1)

Transfection Reagent(V2)

CircRNA(V3)

完全培养基(V4)

96-well

100 μL

1 μg/μL

10 μL

0.3 μL

0.1 μg

90 μL

24-well

500 μL

1 μg/μL

50 μL

1.5 μL

0.5 μg

450 μL

12-well

1 mL

1 μg/μL

100 μL

3.0 μL

1.0 μg

900 μL

6-well

2.5 mL

1 μg/μL

250 μL

7.5 μL

2.5 μg

2.25 mL


注:实验参考用量示例,对于部分细胞类型需要进一步优化。



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