circRNA qPCR引物设计circRNA qPCR检测circRNA表达分析circRNA过表达实验circRNA干扰实验细胞功能实验慢病毒包装circRNA功能分析T系列-circRNA翻译验证R系列-IRES活性检测circRNA翻译-验证研究circRNA注释及功能预测circRNA荧光素酶报告检测circRNA RIP实验circRNA pull-down实验circRNA相互作用组学研究circRNA FISH探针合成circRNA定位分析circRNA全长纳米孔测序 | ONT circRNA full-length Sequencin三代测序全转录组测序 | RNA-seqcircRNA测序 | circRNA-seqmRNA测序 | mRNA-seq小RNA测序 | miRNA-seq转录组学研究核糖体印迹测序 | Ribo-seq核糖体-新生肽链复合物测序 | RNC-seq翻译组学研究RNA m6A甲基化测序 | MeRIP-Seq染色质开放性测序 | ATAC-seq表观组学研究10×Visium空间转录组测序空间转录组学研究外泌体RNA测序 | Exosome RNA-seq外泌体提取及鉴定外泌体研究RNA免疫共沉淀测序 | RIP-seq染色质免疫共沉淀测序 | ChIP-seq核酸蛋白互作研究微生物宏基因组测序 | Metagenomics Sequencing基因组学研究生物医学大数据挖掘分析circRNA定制化分析及绘图常规组学及多组学联合分析单细胞测序数据生信分析生物信息学分析服务RNase RcircRNA qRT-PCR试剂盒circRNA检测circRNA过表达系列circRNA过表达载体系列血液基因组DNA提取试剂盒全血RNA提取试剂盒细胞RNA提取试剂盒核酸提取与纯化RNA pull-down试剂盒RIP试剂盒T7转录试剂盒(生物素标记)分子互作系列外泌体提取试剂盒Taqman探针法支原体检测试剂盒(UNG防污染版)支原体检测核糖体RNA去除试剂盒(人/大鼠/小鼠)核糖体RNA去除试剂盒(植物)RNA-seq文库构建试剂盒RNA建库接头试剂DNA磁珠RNA磁珠高通量测序系列circRNA标准品系列CircLucT7耐高温高产量RNA合成试剂盒环状RNA合成试剂盒T4 RNA连接酶1T4 RNA连接酶2circRNA制备系列原位杂交系列原位杂交系列
CircLuc
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2 CircLuc-10μg.jpg


产品简介

吉赛生物已建成circRNA原液生产体系,预制的circRNA标准品采用全球自主知识产权技术,完整性好、纯度高,可作为实验探索的阳性对照,用于翻译表达验证、转染递送评估、工艺流程优化等领域。

CircLuc是编码萤火虫荧光素酶基因(Firefly Luciferase)的circRNA,翻译表达后,可通过实验检测萤火虫荧光素酶活性。


产品规格


产品名称货号规格目录价(元)性状

GSPure®CircLuc

R0801

100 μg

3500

冻干粉

R0802500 μg9500
R08031 mg15000
R080410 mg100000


运输与保存

产品干冰运输。-80℃ 超低温保存,可以稳定存放一年。



CircLuc能够在真核细胞中高效进行荧光素酶的翻译。下图为使用制备的CircLuc转染293T细胞的案例。


图1:CircLuc转染293T细胞48 h后荧光素酶检测结果









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1、本产品的使用方法及细胞转染的环状RNA用量?

答:本实验方法以使用Lipofectamine® 3000转染试剂于12孔板转染1 μg/μL CircLuc为例,其他规格转染体系请参考下表,使用其他转染试剂请参考具体转染试剂说明书。

(1)接种细胞

转染前一天将细胞铺至12孔板,使转染时的细胞密度达到约60%-70%。

注:不同细胞生长速度不同,接种细胞的数量细胞密度需要依据细胞类型培养时间实验目的而定,一般情况以控制到检测时细胞接近长满为宜;每孔接种的细胞数量应尽量相同,使细胞均匀分布。

(2)转染

对于每个转染样品,请按下面的步骤进行准备:

溶解circRNA:先将冻干粉产品瞬时离心,加入10 μL Nuclease-free Water 至10 μgCircLuc冻干粉中,制成1 μg/μL CircLuc的溶液;

稀释转染试剂:50 μL Opti-MEMTM Medium(V1)中加入3 μL Lipofectamine® 3000 Transfection Reagent(V2),轻轻混匀,室温孵育10 min

稀释circRNA:另一管50 μL Opti-MEMTM Medium(V1)中加入3 μL的P3000TM 试剂和1 μL的1 μg/μL CircLuc(V3),轻轻混匀

将稀释好的转染试剂与稀释好的CircLuc混合,室温孵育5 min。

12孔板每孔更换新鲜完全培养基900 μL(V4);

将100 μL CircLuc转染混合液,加入到含900 μL完全培养基的细胞中,轻轻混匀

将细胞置于37℃的CO2培养箱中培养24 - 48小时

使用萤火虫荧光素酶检测试剂盒检测荧光素酶活性(详细检测方法参考对应的荧光素酶检测试剂盒说明书)。

表1:CircLuc用量参考



每孔

体积

circRNA浓度

Opti-MEMTM Medium(V1)

Transfection Reagent(V2)

CircRNA(V3)

完全培养基(V4)

96-well

100 μL

1 μg/μL

10 μL

0.3 μL

0.1 μg

90 μL

24-well

500 μL

1 μg/μL

50 μL

1.5 μL

0.5 μg

450 μL

12-well

1 mL

1 μg/μL

100 μL

3.0 μL

1.0 μg

900 μL

6-well

2.5 mL

1 μg/μL

250 μL

7.5 μL

2.5 μg

2.25 mL


注:实验参考用量示例,对于部分细胞类型需要进一步优化。



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