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T7耐高温高产量RNA合成试剂盒
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4 T7 Thermostable and High Yield RNA Synthesis Kit(50rnxs).jpg

产品简介

        T7耐高温高产量RNA合成试剂盒可在37~52℃条件下进行高效的体外转录,最佳温度为37℃,50℃反应条件下仍然保留60%以上的活性,而野生型在此温度下无活性。在30µL标准体系中,1µg模板投入可转录产出250-300µg的产物,在6000nt长度依然保持优良的转录效果。

        T7高产耐热的RNA合成试剂盒可在体外高效合成多种类型的RNA,如mRNA、lncRNA、shRNA等。


性能优势

1.提升GC含量较高RNA的转录效率;

2.提升长片段RNA的合成能力;

3.在使用帽类似物时,提高共转录的加帽效率;

4.减少dsRNA副产物的形成,降低合成RNA的免疫原性。


下游应用

        利用该试剂盒得到的RNA适用于多种下游应用,如RNA结构和功能研究、反义RNA及RNAi实验、微阵列分析、显微注射、体外翻译和RNA疫苗等。

        T7 RNA Polymerase对T7噬菌体启动子具有高度的特异性,并可以其作为启动子,DNA 作为模板体外合成正义链或反义链RNA。双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA Polymerase的底物模板,因此线性质粒、PCR 产物均可用作体外合成RNA的模板。


产品规格

产品名称

货号

规格

目录价(元)

保存条件

GSPure®T7 Thermostable and High Yield RNA Synthesis Kit

R0405

50 rxns

2080

-20℃





耐热性强:

图片3.png   

GSPure®T7 Thermostable and High Yield RNA Synthesis Kit在50℃下仍能保持活性并高效转录。


转录长度范围广:

图片4.png

GSPure®T7 Thermostable and High Yield RNA Synthesis Kit在合成300~6000nt长度的转录本时保持优良的转录效果。


转录产量高:

图片5.png


GSPure®T7 Thermostable and High Yield RNA Synthesis Kit的30μL反应体系中,1μg DNA模板投入可合成250~300μg RNA。









吉赛生物GSPure®T7 Thermostable and High Yield RNA Synthesis Kit Cat.No.R0405.pdf
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1、低产量全长RNA

如果转录模板是产生全长的RNA,其产量可能明显低于预期;DNA模板里包含的污染物可能会抑制RNA聚合酶的活性,或者可能由于DNA的浓度不正确。或者说,DNA模板可能需要额外的纯化,建议用酚氯仿抽提法。

2、低产量短转录本

短转录本(<0.3 kb)的高产量可以通过增加孵育时间和增加模板的量来获得。孵育反应长达16 h或者使用多达2 µg的模板将会有助于实现最大产量。

3RNA产物片段大于预期

如果电泳显示产物条带大于预期,可能原因:①质粒模板可能没有完全线性化;②有义链3'端为突出结构;③RNA存在未完全变性的二级结构。建议确认模板结构,并将电泳方式由琼脂糖胶换成变性胶来检测RNA产物。

4RNA转录本在变性胶中污染

如果RNA开始出现在变性的聚丙烯酰胺胶或琼脂糖凝胶上(例如污染),这意味着RNA酶污染了DNA模板。污染有RNA酶的DNA模板会影响合成转录本的长度(比预期的的转录本短)。如果质粒模板污染了RNA酶,有必要用酚氯仿方法抽提一遍,再沉淀DNA,用RNase-free Water溶解

5、转录产物产量低

模板与产量密切相关,实验组产量明显低于对照组,可能原因:①实验模板中有抑制反应的成分;②实验模板本身原因。建议做一个对照组,一个实验组。若对照组产量正常但实验组产量低,说明实验模板本身原因导致产低,请尝试以下方案解决:

a.重新纯化模板;b确定模板定量以及其完整性;c.延长37℃反应时间;d.加大模板投入量;e.尝试其它的启动子和RNA聚合酶。

6、产物电泳拖尾现象

电泳过程中有拖尾现象,可能原因:①实验操作过程被RNA酶污染;②DNA模板被RNase污染。体系中的RNA酶抑制剂只能抑制痕量的RNA酶残留,建议重新纯化模板DNA,并在实验过程中使用RNase-free的枪头和EP管,佩戴一次性乳胶手套和口罩,所有试剂均用RNase-free ddH2O配制。



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