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 circRNA服务

circRNA服务
circRNA体外制备
来源: | 作者:geneseed | 发布时间: 2017-09-02 | 26377 次浏览 | 分享到:

环状RNA在生物界内广泛存在,由于它具有独特的生物学结构,其在生物功能调控和疾病治疗方面具有重要的作用,新型冠状病毒肺炎疫情也使得核酸疫苗取得了巨大的关注。环状RNA的体外大规模精准制备是环状RNA未来科研、临床及产业化发展进步的重要前提。

 

吉赛生物拥有国内领先的核心专利技术——一种制备环状RNA的方法(国家授权发明专利:202010094558.6),借助线性RNA的二级结构,以设计好的线性RNA为原料,通过酶促反应实现RNA自我环化,无需借助夹板链或辅助链,显著抑制成环过程大分子副产物的产生,实现目的环状RNA规模化和高效制备。经过纯化回收后能够得到高浓度高纯度的环状RNA,可以直接用于细胞转染或动物注射等后续实验研究。

 

服务全方位:

科研级别:

1. 目标序列从设计合成到环化验证的全流程一站式服务

2. 线性RNA产物的环化与质检服务

工业级别:

大规模用于研发的环状RNA体外制备

 

技术优势:

制备高效:采用独特的设计方法与领先的专利技术,无需借助夹板链或辅助链,环化效率通常可达80%以上。

环化片段长:可提供20~3000 nt的环状RNA体外制备,若制备需求大于3000 nt,请详询。

质控严谨:采用严谨的质控方法,多维度对环化产物进行质控。

技术先进:拥有先进的实验设备和资深的技术团队,快速响应并交付客户需求。

服务全面:提供序列到成品的一站式服务,也提供线性RNA的环化服务,还提供工业级别的大规模制备。

个性化强:客户可定制RNA环化服务。

 

不同环化策略的对比:

T4 DNA/RNA连接酶

内含子自剪切

吉赛生物核心专利技术

 

无外源序列残留

环化效率较低

纯化工艺放大难

有病毒序列残留

环化效率较高

纯化工艺放大容易

无外源序列残留

环化效率较高

纯化工艺放大容易

 

服务流程:

 

 

服务内容:

客户提供:客户信息、RNA序列、制备规格以及其他要求等

我们交付:约定规格的环状RNA与环状RNA的质控结果

 

交付周期:

以交付100 μg环状RNA为例,周期为30~35个工作日,若交付的环状RNA量更多,周期需要适当延长。

 

严格质控,确保品质

1、RNase R耐受测试

图1显示,体外制备的环状RNA完全耐受RNase R*的切割(RNase R 37℃反应15 min)。

 

图1 环化RNA1.5%琼脂糖电泳检测

* 吉赛生物自主研发的国内首款RNase R,引用文献超100篇,已服务200多家实验室。点击详情:RNase R

 

2、环状RNA环化接口测序鉴定

对于纯化获得的环状RNA,进一步通过逆转录成cDNA,设计PCR引物测序来检测环化接口是否正确,图2显示:体外制备的环状RNA在指定的环化区域发生了环化。

 

图2 环化RNA Sanger PCR测序检测环化接口

3、环状RNA完整度检测

通过Agilent 2100质检,图3显示:体外制备的环状RNA完整度高,没有发生降解,片段大小符合预期,无其他杂带。

 

图3 Agilent 2100质检环状RNA结果

 

相关服务:

吉赛生物也提供circRNA过表达载体构建服务(国家授权发明专利:201510566302),优化升级的第五代circRNA过表达载体现有pCD5-ciR、pCD25-ciR、pLO5-ciR、pLC5-ciR、pK5ssAAV-ciR和pK25ssAAV-ciR,能满足普通真核表达、慢病毒包装和腺相关病毒(AAV)包装等多种用途。载体均携带优化过的侧翼成环框架,含有精心改造的Alu元件、QKI等RBP的结合位点,并使用全新设计的环化介导序列。