IRES活性检测

服务介绍

circRNA的翻译模式分为IRES介导和m6A甲基化修饰介导，针对这些潜在的翻译方式，吉赛生物提供R系列载体构建和表达验证服务，验证circRNA的翻译是否由IRES介导。

IRES验证载体示意图

R1：Empty Vector（Luc2空载体）

Luc2报告载体是基于海肾荧光素酶（Renilla Luciferase, R-Luc）和萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase, F-Luc）的cap-independent translation报告载体，R-Luc由5’ m7G帽子结构介导翻译起始，F-Luc只在插入有IRES（Internal Ribosome Entry Site）活性的序列或能介导翻译起始的序列时可以翻译。Luc2空载体含有多克隆酶切位点，命名为Luc2-IRES- Report。

R2：EMCV IRES（插入EMCV IRES序列的Luc2报告载体阳性对照）

Luc2阳性对照载体含有EMCV IRES序列，命名为Luc2-EMCV-IRES-Report。

R3：IRES（插入预测IRES序列的Luc2报告载体）

使用Luc2-IRES-Report载体进行构建，插入预测的IRES序列全长。

R4：IRES-Del1（插入预测IRES前半部分序列的Luc2报告载体）

使用Luc2-IRES-Report载体进行构建，插入部分预测的IRES序列（已删除后半部分）。

R5：IRES-Del2 (插入预测IRES后半部分序列的Luc2报告载体)

使用Luc2-IRES-Report载体进行构建，插入部分预测的IRES序列（已删除前半部分）。

客户提供

circRNA名称（ID）、物种&已预测的IRES序列信息及序列删减要求信息。

我们提供

1. R系列翻译Luc2-IRES-Report载体质粒（可选：R1-R5）；

2. 目的载体：10μg质粒+200μL甘油菌；

3. 对照载体：10μg质粒+200μL甘油菌；

4. Luc2-IRES-Report载体构建与验证实验报告：

①　载体构建步骤；

②　载体测序验证结果原始文件；

③　细胞转染实验步骤；

④　荧光素酶活性检测实验报告。