• ·
  • RIP

  • 产品介绍
  • 案例解析
  • 结果展示
  • FAQ

  • 服务介绍

     

    RNA免疫沉淀(RIP)利用针对目标蛋白质的抗体把相应的RNA-蛋白质复合物沉淀下来,经过分离纯化并对结合在复合物上的RNA进行测序或PCR分析。RIP可应用于研究miRNA调节靶点、RNA与RBP(RNA结合蛋白)的互作关系等。



    RIP技术原理



    技术优势

     

    1. 核酸和蛋白实验兼做,结果可靠;

    2. 自主研发RIP试剂盒,畅销国内市场,效果有保证。



    客户提供

     

    1. 新鲜细胞/组织样本(组织≥100mg,细胞不少于1E+7个),细胞须保证无支原体污染;

    2. IP级别抗体和抗体信息;

    3. qPCR检测基因信息:物种、基因名称、长度和序列等,指定具体转录本(例如NCBI编号NM_001126113.2);

    4. RIP产物的其他检测项目(RIP-seq或者IP蛋白样本质谱)。



    我们提供

     

    1. RIP实验报告(方法、流程,结果);

    2. RIP剩余产物。





  • 案例1



    参考文献:

    Bai D, Zhao J, Wang R, Du J, Zhou C, Gu C, Wang Y, Zhang L, Zhao Y, Lu N. Eubacterium coprostanoligenes alleviates chemotherapy-induced intestinal mucositis by enhancing intestinal mucus barrier. Acta Pharm Sin B. 2024 Apr;14(4):1677-1692. doi: 10.1016/j.apsb.2023.12.015. Epub 2023 Dec 30. PMID: 38572095; PMCID: PMC10985029.



    案例2



    参考文献:

    Xu L, Ma X, Zhang X, Zhang C, Zhang Y, Gong S, Wu N, Zhang P, Feng X, Guo J, Zhao M, Ren Z, Zhang P. hsa_circ_0007919 induces LIG1 transcription by binding to FOXA1/TET1 to enhance the DNA damage response and promote gemcitabine resistance in pancreatic ductal adenocarcinoma. Mol Cancer. 2023 Dec 4;22(1):195. doi: 10.1186/s12943-023-01887-8. Erratum in: Mol Cancer. 2024 Jan 16;23(1):16. PMID: 38044421; PMCID: PMC10694898.





  • anti-SNRNP70为目的抗体,anti-IgG为对照抗体,在Hela细胞裂解样本中,进行免疫沉淀。免疫沉淀所得蛋白质样品,进行Western blot检测,Input样本与目的样本在约70KDa大小位置有明显条带,阴性对照样本无条带。

    免疫沉淀所得RNA逆转成cDNA后,以U1 snRNA特异性引物,进行qPCR分析,RIP组相对表达显著高于IgG组,指示SNRNP70富集U1 snRNA。


    Western blot检测SNRNP70:



    qPCR检测U1 snRNA:




  • 1. RIP送样里细胞需要量是1E7的细胞量,是必须要达到1✖10的7次方的细胞量吗?

    我们推荐用7次方进行,这种内源结合本来就只能结合少量的蛋白和RNA,如果最开始的细胞量少,结合下来的物质可能会更少。

     

    2.RIP实验产物能否进行去线性,进行circRNA建库?

    如果客户RIP捕获前已经打断了RNA,这直接可以判断,不能去线性

    如果捕获产物中RNA的片段化程度比较高,不建议用去线性的方法测circRNA。

    一般RIP测序,都是建议用去rRNA链特异的方面进行建库测序。

     

    3.RIP结果WB检测正常,Input、IP、Igg三组ct值几乎无差异说明什么?

    说明目的蛋白与检测基因无特异性结合。

     

    4.为什么RIP实验前要做WB预实验评估?

    WB预实验主要目的:

    ① 检测抗体的特异性,是否能结合目的蛋白;

    ② 检测样本中目的蛋白是否有表达及丰度水平;

    ③ 总之,检测该样本能否满足做RIP实验的最基本条件。

    ④ RIP预实验做的是WB检测,跟我们平常理解的预实验不太一样,这是探索性实验,预实验的目的是检测这个实验的基本条件。

     

    5. 我的抗体做WB都有目的蛋白条带的,为啥做RIP就没条带了?

    免疫试验有很多,但实验目的不一样,例如WB、ELISA、IP、IF、ChIP、IHC(P)、FACS,其中只有WB是一种需要将蛋白质变性的实验,用强烈的蛋白变性剂SDS和β巯基乙醇,将蛋白质的三维结构全部抹去,这种情况下任何一种该蛋白的抗体都能识别WB实验中变成直线状态的抗原;但能做WB的抗体就不一定能用来做非变性试验IP、IF、IHC了,因为天然蛋白的三维结构隐藏了很多抗体结合位点,WB级别的抗体无法与之结合。做RIP实验,需要选购IP级别的抗体。

     

    6. 在RIP实验中,为什么IP和WB使用的抗体需要来源于不同的种属?

    RIP实验中,IP和WB使用的抗体需要来源于不同的种属,否者在跑WB时,会在55KD和25KD的位置出现较强的重链和轻链,影响目的蛋白的曝光。



如果您对产品或服务有兴趣,可通过以下方式联系我们
在下方表单
填写需求描述给我们
在线咨询
工具快速咨询
拨打免费电话:
400-8989-400
发送邮件至邮箱:
geneseed@geneseed.com.cn
    在线订购:
    立即购买
    加入购物车(0