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  • qRT-PCR试剂盒

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  • 吉赛生物提供circRNA qRT-PCR试剂盒,产品包含逆转录和定量PCR检测配套试剂,用于circRNA表达水平及差异的检测分析,同样适用于mRNA以及lncRNA。


    本产品的TransScript RT Enzyme (M-MLV) 是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基础上通过体外分子进化技术获得的全新逆转录酶。大幅提高了热稳定性,在50℃的半衰期超过240分钟,并可在55℃长时间反应而保持稳定,非常适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。定量PCR检测的试剂是使用SYBR Green I嵌合荧光法进行qPCR的专用试剂。circRNA和lncRNA 的表达水平相对较低,需要摸索多个条件才能优化扩增体系,本产品配合针对qPCR优化的最适Buffer,可以有效抑制非特异扩增,显著提高扩增效率,适用于进行高灵敏度的qPCR反应。



    产品特点


    1、 试剂盒包含了Oligo dT和随机引物,适用范围广;

    2、 针对低拷贝RNA优化的体系扩增效率高,特异性强,灵敏度高;

    3、 全方位配套的引物产品及技术服务:吉赛生物依托多年技术经验,已验证circRNA引物1万多对,筛选出特异性引物达2000多对,并建立了“circRNA引物库”,可向研究人员提供引物序列信息,同时可提供‍circRNA qPCR引物设计、circRNA qPCR检测服务,有效保障实验快速成功。




  • [1] IF13.493 The circFASN/miR-33a pathway participates in tacrolimus-induced dysregulation of hepatic triglyceride homeostasisSignal Transduction and Targeted Therapy


    [2IF13.493 The circFASN/miR-33a pathway participates in tacrolimus-induced dysregulation of hepatic triglyceride homeostasisSignal Transduction and Targeted Therapy


    [3IF9.229 In Vitro Study on the Piezodynamic Therapy with a BaTiO3-Coating Titanium Scaffold under Low-Intensity Pulsed Ultrasound StimulationACS Applied Materials & Interfaces


    [4IF9.229 In Vitro Study on the Piezodynamic Therapy with a BaTiO3-Coating Titanium Scaffold under Low-Intensity Pulsed Ultrasound StimulationACS Applied Materials & Interfaces


    [5IF8.886 Effects of long-term culture on the biological characteristics and RNA profiles of human bone-marrow-derived mesenchymal stem cellsMolecular Therapy-Nucleic Acids






  • A常见问题

     

    1、如何设置溶解曲线的温度?

    我们做测试的时候用的是ABI

    7500的仪器,溶解曲线的设置都是仪器默认的,所以溶解曲线用仪器默认的即可。

     

    2、GS0202-2试剂盒只能用于circRNA的逆转录吗?

    不是的,也可用于普通的mRNA和LncRNA的逆转录。

     

    3、Reverse Transcription Primer中是否均包含Oligo dT和随机引物,还是只包含其中一种引物?

    包含了Oligo dT和随机引物。

     

    4、我们的荧光定量PCR试剂盒有哪些优点?

    扩增效率高和特异性好。

     

    5、在配置qPCR的反应液时,反应体系为20ul,模板量应加多少合适?

    建议用1ug的RNA进行逆转录,逆转录后的产物稀释5-10倍,取2ul cDNA进行qPCR反应。可根据客户的实验要求进行适当的调整。

     

    6、GS0202-2试剂盒可用于cfRNA的逆转录吗?

    可以的。

     

    7、GS0202试剂盒的引物设计合成需要我们提供哪些信息?

    需要提供种属信息、相关的circRNA ID号和序列。

     

    8、里面master mix中是否可以直接跑电泳,还需要上样缓冲液么?

    需要加。

     

    9、CT 值出现太晚或检测为阴性

    a. 扩增效率极低:优化反应条件,尝试三步法扩增程序。

    b. 模板浓度太低:减少稀释度重复试验,一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。

    c. 模板降解:重新制备模板,重复试验。

     

    10、反应结束无扩增曲线出现

    a. circRNA 在细胞株或组织中不表达:更换模板。

    b. 反应循环数不够:一般设置循环数为 40,但需要注意的是过多的循环数会增加过多的背景信号,降低数值可信度。

    c. 确认程序中是否设置了信号采集步骤:两步法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段;三步法扩增程序应当将信号采集设置在 72℃延伸阶段。

    d. 模板浓度太低:减少稀释度重复试验,一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。

    e. 模板降解:重新制备模板,重复试验。

     

    11、阴性对照也出现明显扩增

    反应体系或水被污染:更换新的 Mix 或者水重复试验。反应体系在超净工作台内配置,减少气溶胶污染。

     

    12、实验重复性差

    a. 加样体积失准:使用性能较好的移液枪,扩大反应体积,将模板做高倍稀释,以大体积加入反应体系中。

    b. 定量 PCR 仪不同位置温度控制不一致:定期校准仪器。

    c. 模板浓度太低:模板浓度越稀,重复性越差,较少模板稀释度或者提高加样体积。

     

    13、本产品是否可以 4℃储存

    a. 不可以。4℃储存将会导致产品活性下降。

    b. 该产品-20℃储存可以长期保持活性,推荐-20℃储存。

    c. 因反复冻融也可能导致产品活性下降,因此当每次用量较小时,推荐小体积分装后-20℃储存。

     

    B注意事项


    1、本产品尽量避免反复冻融,以免酶活下降。如每次使用量较少,推荐小份分装使用。

     

    2、使用前请上下颠倒混匀,请勿涡旋以免产生过多气泡引起反应体系失准,进而影响定量结果。混匀后轻微离心后即可使用。如操作不慎产生气泡,请再次离心后使用。

     

    3、由于产品中的 2×qPCR SYBR Green Master Mix 含有荧光染料 SYBR Green I, 因此无论保存 Mix还是配置反应体系时都应该尽量避免强光照射。




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产品规格
产品名称 产品货号 规格 数量 价格(元)
GENESEED®circRNA qRT-PCR Kit GS0201 50 rxns RT+500 rxns qPCR 2980
GENESEED®circRNA qRT-PCR Kit GS0202 50 rxns RT 1400
GENESEED®circRNA qRT-PCR Kit GS0203-1 300 rxns qPCR 1580
GENESEED®circRNA qRT-PCR Kit GS0203-2 500 rxns qPCR 1880
GENESEED®circRNA qRT-PCR Kit GS0203-3 1000 rxns qPCR 2380
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