PNAS | 吉赛生物RNase R助力IVT-free RNA研究

现有蛋白编码RNA通常依赖DNA模板和体外转录技术制备。该过程涉及模板构建、RNA转录及纯化等多个步骤，同时，T7 RNA聚合酶介导的IVT过程还可能产生双链RNA（dsRNA）等副产物，对RNA产品纯度及免疫学特性评价带来影响。

化学合成RNA无需DNA模板和IVT过程，可简化RNA制备流程。然而，受RNA长度限制，传统化学合成RNA通常难以实现蛋白编码。基于此，本研究构建了一种蛋白编码RNA寡核苷酸平台，并对其蛋白表达能力、免疫原性及抗肿瘤免疫效果进行了系统评价。

研究团队构建了蛋白编码RNA寡核苷酸平台。该平台通过化学合成获得RNA寡核苷酸，并结合BBV翻译增强元件及RtcB介导的RNA环化策略，在细胞内实现RNA环化及滚环翻译（Rolling Circle Translation，RCT），完成目标蛋白表达。

结果显示，PEO能够在细胞内形成环状RNA并稳定表达目标蛋白。与IVT制备RNA相比，PEO样品中未检测到明显dsRNA污染，PKR激活水平及炎症相关基因表达均较低。

在动物模型中，PEO疫苗能够诱导抗原特异性CD8⁺ T细胞应答，并抑制黑色素瘤生长；在胶质瘤模型中，与抗PD-1治疗联合应用后进一步提高了治疗效果。

优质的工具酶是RNA研究的重要支撑。吉赛生物RNase R（R0301）应用于本研究相关实验。

在IVT来源RNA的制备过程中，研究团队完成转录并经DNase I处理后，采用吉赛生物RNase R处理circRNA，随后依次采用RNA纯化试剂盒和HPLC进行纯化，获得用于后续实验的RNA。此外，研究中还采用RNase R消化结合尿素PAGE分析，对RtcB介导的RNA环化效率进行了评价。

RNase R消化用于RNA环化效率评价（Figure 2C、2D）

RNase R是一种具有3′→5′外切核糖核酸酶活性的RNA工具酶，可高效降解线性RNA，对完整环状RNA具有较高耐受性，是circRNA研究中常用的RNA工具酶。

产品特点

★ 特异性消化线性RNA，可用于circRNA富集与结构验证相关实验；

★ 反应体系简便，37℃一步反应；

★ 消化产物可直接用于下游实验。

吉赛生物 RNase R（R0301）可应用于：

•  circRNA制备后的线性RNA去除；

•  circRNA富集；

•  RNA环化效率评价；

•  RNase R消化实验；

•  环状RNA结构验证；

•  circRNA质量评价。

本研究建立了一种无需体外转录的蛋白编码RNA寡核苷酸平台，为化学合成RNA在蛋白表达及RNA疫苗领域的应用提供了新的研究思路。

围绕RNA制备、RNA环化及结构评价等关键实验环节，吉赛生物可提供相应产品支持，为RNA制备、纯化及结构分析等实验提供可靠的工具支持。

原文链接：

https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.2529799123