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  • T7高产量RNA合成试剂盒

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    T7高产量RNA合成试剂盒使用T7 RNA聚合酶(T7 RNA Polymerase)进行体外转录,以含有T7启动子序列的线性双链DNA为模板、NTPs为底物对启动子下游DNA序列进行转录,使客户能够简单快速地获得大量RNA产物。本试剂盒也能以修饰核苷为底物获得生物素、染料或放射性标记的RNA,以帽子结构或帽子类似结构为底物获得加帽的RNA。本试剂盒内含常用的修饰核苷供转录需求选择使用。



    应用场景


    转录合成的RNA可用于RNA结构和功能研究、RNase保护、探针杂交、anti-sense RNA和 RNAi等应用,也可通过加帽加尾产生mRNA,用于体外翻译、转染等下游应用。



    运输与保存方法 


    ≤0℃运输;-25℃~-15℃保存。



  • 1、转录产物产量低或转录失败

    模板的质量与产量密切相关,实验组产量明显低于对照组可能原因有:①可能是模板自身原因;②实验模板中有抑制反应的成分。

    建议:①重新纯化模板;②确定模板定量以及其完整性;③延长反应时间;④加大模板投入量;⑤尝试其它的启动子和RNA聚合酶。

     

    2、产物电泳拖尾现象

    可能原因有:①实验操作过程被RNase污染;②DNA模板被RNase污染。

    建议:①实验过程中使用RNase-free的枪头和EP管,佩戴一次性乳胶手套和口罩,所有试剂均用RNase free H2O 配制;②重新纯化模板DNA。

     

    3、RNA转录长度大于预期

    如果电泳后的条带大于目标条带,可能原因有:①质粒模板没有完全线性化;②RNA存在未完全变性的二级结构;③有义链3'端为突出结构。

    建议:①确认模板结构,检查模板是否完全线性化,如有必要,额外进行线性化;②将电泳方式由琼脂糖胶换成变性胶来检测RNA产物。

     

    4、RNA转录长度小于预期

    如果电泳后的条带小于于目标条带,可能原因有:①模板序列中包含类似于T7 RNA聚合酶的终止序列;②模板中GC含量高形成高级结构。

    建议:①降低反应温度(比如,30℃),有时降低温度可以增加转录长度,但会降低产量;②不同的聚合酶识别不同的终止序列,若模板中含终止结构,建议尝试不同的 RNA 聚合酶;③若模板GC含量高,采用42℃进行转录反应,或者添加SSB蛋白提高转录效率。

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产品规格
产品名称 产品货号 规格 数量 价格(元)
GSPure® T7 High Yield RNA Synthesis Kit(pUTP) R0406 50 rxns 2000
GSPure® T7 High Yield RNA Synthesis Kit(N1-Me-pUTP) R0407 50 rxns 2000
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